色譜圖

色譜圖

被分離組分的檢測信号随時間分布的圖象
樣品流經色譜柱和檢測器,所得到的信号-時間曲線,又稱色譜流出曲線(elutionprofile)。色譜圖是指被分離組分的檢測信号随時間分布的圖象。色譜圖形狀随色譜方法和檢測記錄的方式不同而不同,迎頭色譜和頂替色譜的色譜圖為一系列台階。在洗脫法色譜中,若采用微分型檢測器時,分離組分的檢測信号随時間變化的圖形為近似于高斯分布的一組色譜峰群,色譜圖的縱坐标為檢測器的響應信号,橫坐标為時間、體積或距離。
    中文名:色譜圖 外文名:elution profile 别名:色譜流出曲線 示例:一個簡單的色譜圖 相關術語:樣品流經色譜柱和檢測器 使用方法:物質濃度和對應峰面積成正比

相關術語

色譜圖(chromatogram)--樣品流經色譜柱和檢測器,所得到的信号-時間曲線,又稱色譜流出曲線(elutionprofile)。

⊕基線(baseline)--流動相沖洗,柱與流動相達到平衡後,檢測器測出一段時間的流出曲線。一般應平行于時間軸。

⊕噪音(noise)--基線信号的波動。通常因電源接觸不良或瞬時過載、檢測器不穩定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所緻。

⊕漂移(drift)--基線随時間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動相及流量的不穩定所引起,柱内的污染物或固定相不斷被洗脫下來也會産生漂移。

⊕色譜峰(peak)--組分流經檢測器時相應的連續信号産生的曲線。流出曲線上的突起部分。正常色譜峰近似于對稱性正态分布曲線(高斯Gauss曲線)。不對稱色譜峰有兩種:前延峰(leadingpeak)和脫尾峰(tailingpeak).前者少見。

⊕拖尾因子(tailingfactor,T)--T=B/A,用以衡量色譜峰的對稱性。也稱為對稱因子(symmetryfactor)或不對稱因子(asymmetryfactor)《中國藥典》規定T應為0.95~1.05。T<0.95為前延峰,T>1.05為拖尾峰。

⊕峰底--基線上峰的起點至終點的距離。

⊕峰高(Peakheight,h)--峰的最高點至峰底的距離。

⊕峰寬(peakwidth,W)--峰兩側拐點處所作兩條切線與基線的兩個交點間的距離。W=4σ。

⊕半峰寬(peakwidthathalf-height,Wh/2)--峰高一半處的峰寬。Wh/2=2.355σ。

标準偏差(standarddeviation,σ)--正态分布曲線x=±1時(拐點)的峰寬之半。正常峰寬的拐點在峰高的0.607倍處。标準偏差的大小說明組分在流出色譜柱過程中的分散程度。σ小,分散程度小、極點濃度高、峰形瘦、柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。

⊕峰面積(peakarea,A)--峰與峰底所包圍的面積。A=×σ×h=2.507σh=1.064Wh/2h

使用方法

橫坐标是保留時間,縱坐标是UV的吸收峰,物質濃度和對應峰面積成正比。

色譜流出曲線

色譜圖上的色譜流出曲線可以說明什麼問題 :n根據色譜峰的數目,可判斷樣品中所含組分的最少個數;

根據色譜峰的保留值進行定性分析

根據色譜峰的面積或峰高進行定量分析

根據色譜峰的保留值和區域寬度評價色譜柱的分離效能;

根據兩峰間的距離,可評價固定相及流動相選擇是否合适。

常見問題

色譜圖常見問題主要有兩類:色譜峰峰形異常(例如負峰,寬峰,肩峰,雙峰,峰形不對稱等)以及色譜峰保留時間問題(保留時間不穩定等)

色譜峰峰形異常問題

(1)色譜圖中未出峰:進樣問題(未進樣或樣品分解);流動相問題(泵未輸液或流動相不正确),檢測器設置不正确或檢測器有問題。

(2)一個或幾個峰是負峰:流動相吸收本底高;進入空氣;離子對分離中的系統峰;樣品組分的吸收(RI或UV)低于流動相。

(3)所有的峰均為負峰:信号電纜接反或檢測器輸出極性設置颠倒;光學裝置尚未達到平衡。

(4)所有的峰都是寬峰:系統未達到平衡;溶樣的溶劑比流動相強很多;色譜柱類型或尺寸不正确;色譜柱或保護柱被污染或降級;溫度變化對色譜柱的影響。

(5)較早洗脫的峰呈寬峰:進樣體積過大或樣品濃度太高;進樣器有問題,定量環(loop)大小不合适;在線過濾器、保護柱、色譜柱或管路堵塞;管路問題(内徑不對或切管不正确);管路連接問題(接頭或錐箍不正确);檢測器時間常數不正确。

(6)峰比預想的要小:樣品黏度過大;進樣器有問題或進樣體積有誤;檢測器設置不正确,定量環體積不正确;檢測器輸出未置零;用了不正确的檢測器輸出信号;檢測池被污染;檢測器的燈可能有問題。

(7)雙峰或肩峰:進樣量或樣品濃度過大;保護柱或色譜柱進口堵塞;保護柱或色譜柱污染或失效。

(8)前伸峰:進樣量或樣品濃度過大;溶樣的溶劑相對于流動相太強;保護柱或色譜柱污染或失效。

(9)拖尾峰:保護柱污染或色譜柱失效;進樣問題;檢測器時間常數不正确。

(10)平頭峰:檢測器設置不正确;進樣體積太大或樣品濃度太高。

(11)流動相洗滌強度南弱漸強時出現很多雜質峰:強溶劑将弱溶劑洗不出的雜質沖出來了,不影響柱的性能。

(12)在UV色譜圖中,靠近死時間處出現負峰:進樣時壓力波動所緻;樣品溶劑比流動相的UV吸收值低。

色譜峰保留時間問題

(1)保留時間飄忽不定(各次運行之間):系統不穩定或未達到平衡;泵壓力不穩,有氣泡;進樣體積過大或濃度過大;溫度波動;流動相混合不均勻;色譜柱被污染。

(2)保留時間增加或減少(各次運行之間):系統未達到平衡;泵流速變化;溫度變化;柱污染,柱效下降;流動相被污染;溶劑入口過濾器堵或管路堵塞;系統滲漏。

(3)保留時間改變到一個新的恒定值:流動相不正确或其組成不正确;泵流速變化;實際輸液的流速不正确(泵失靈或故障);溫度變化;色譜柱尺寸或類型不正确;柱被污染;流動相含有穩定劑或穩定劑發生變化;輸液系統的梯度滞後體積不正确 。

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