疯牛病简介
疯牛病是主要发生在成年奶牛中的一种亚急性进行性神经系统疾病,以潜伏期长、病情逐渐加重、中枢神经系统退化、最终死亡为特征。疯牛病于1985年首先在英国发现,然后传播到欧洲及世界多个国家和地区,给全世界的养牛业造成了巨大损失,并影响到牛源材料相关的工业。特别是随着疯牛病的流行,由同一致病因子引起的人的新型克一雅氏病(俗称人类疯牛病)出现,导致了全世界对疯牛病的恐慌,给动物和人类健康及国际政治经济等领域带来全球性影响。
症状
疯牛病可表现为神经症状和全身症状,神经症状常较全身症状出现更早。常见的神经症状有行为异常、共济失调和感觉过敏。行为异常主要表现为离群独处、焦虑不安、恐惧、狂暴或沉郁、神志恍惚、不自主运动(如磨牙、肌肉抽搐、震颤和痉挛等)、不愿通过水泥地面、拐弯、进入畜栏、过门或挤乳等。病畜当有人靠近或追逼时往往出现攻击行为,这也是其俗称疯牛病的一个重要原因。
疯牛病的共济失调主要表现为后肢运动失调,于急转弯时尤为明显。患牛快速行走时步态异常,同侧前后肢同时起步,而后发展为行走时后躯摇晃、步幅短缩、转弯困难、易摔倒,甚至起立困难或不能站立而终日卧地。感觉过敏常表现为对触摸、光和声音过度敏感,用手触摸或用钝器触压牛的颈部、肋部时,病牛会异常紧张、颤抖,用扫帚轻碰后肢,也会出现紧张的踢腿反应,病牛听到敲击金属器械的声音,会出现震惊和颤抖反应,病牛在黑暗环境中对突然打开的灯光,会出现惊恐和颤抖。这是疯牛病病牛很重要的临床诊断特征。50%的病牛在挤乳时乱踢乱蹬。在安静环境中,病牛感觉过敏症状明显减轻,其他神经症状也可有所缓解。
70%~73%的病牛出现的全身症状是体重下降和产奶量减少,绝大多数病牛后期出现心率缓慢(平均50次/min),呼吸频率增快,强直性痉挛,粪便坚硬,两耳对称,性活动困难。从最初出现症状到患牛死亡或急宰,病程可持续几周到12个月。病理解剖肉眼变化不明显,肝脏等实质器官多无异常。病理组织学变化主要局限于中枢神经系统,其特征主要有:脑干灰质两侧呈对称性病变,脑灰质呈空泡变性、神经元消失和原胶质细胞肥大,神经纤维网有中等数量、不连续的卵形和球形空洞,神经细胞肿胀成气球状,细胞质变窄。另外,还有明显的神经细胞变性及坏死。神经细胞发生凋亡并形成空泡状结构,使有关信号传导发生紊乱,从而使动物表现出自主运动失调、恐惧、生物钟紊乱等神经症状。
病原
早期的研究没有成功分离到疯牛病和其他相关疾病的病原,也没有检测到与感染有关的免疫反应。虽然提出了杀虫剂和自身免疫反应等假说,但这些理论都不能解释疯牛病病原的特性。20世纪80年代,美国生物学家普鲁塞纳在疯牛病的研究中发现疯牛病的传染完全是朊病毒(又称朊蛋白),一种奇特的无核酸的蛋白侵染颗粒的作用,而没有其他基于RNA或DNA的作用。
主要分布在病牛的脑、颈部脊髓、脊髓末端等中枢神经系统,脾、淋巴结、肌肉和血液中较少,除此以外,包括外周神经在内的40多种组织中都很难检测到其分布。研究表明,1g疯牛病病牛的脑组织经口摄入就可引起牛发病,而1g纯的朊病毒抽提物可使1000万头牛感染发病。朊病毒可被2%~5%的次氯酸钠或90%的石炭酸经24h处理灭活,而紫外线、离子辐射、超声波、非离子型去污剂、蛋白酶等能使普通病毒灭活的理化因子却具有较强的抗性。
疯牛病是朊蛋白蛋白质二级结构中的α-螺旋变为β折叠所致。正常型朊蛋白,二级结构中仅存在a-螺旋,它可能与神经系统功能维持有关,致病朊病毒PrPsc有多个B-折叠存在,是PrPC的构象异构体.初始的和新生的PrPsc继续攻击另外两个PrPC,这种类似多米诺效应使PrPsc积累,直至致病.
朊病毒的诊断
根据脑部受破坏的区域不同,朊病毒所致人类的库鲁病、克雅氏综合症等发病的症状也不同,如果感染小脑,则会引起运动机能的损害;如果感染大脑皮层,则会引起记忆下降,最后进行性死亡。病理改变多发生在中枢神经系统,伴弥漫性神经元退行性变和大脑皮质或神经节的海绵样变。朊病毒的诊断除了根据特有的临床特征和病理学诊断外,要依靠实验室的诊断。
检测方法
实验室检测朊病毒的方法有很多种,动物传递实验是早期判断是否感染朊病毒的方法,它除了可以判断人或者动物是否感染朊病毒之外还可以判断感染的滴度和毒性。但是因为动物实验耗时长,费用高,误差大,所以已经逐渐被更快速准确的其他方法所替代了。将蛋白检测技术和解剖学保存技术相结合的组织印迹技术可以用于检测微量朊病毒,灵敏度和准确性都很高,但在临床上需要采取组织标本,不适于快速检测。斑点印迹法也需要组织样本,且灵敏度较低,但是操作简单,对设备要求也不高,适合大量样本筛查。免疫印迹可以鉴定标本中特定的成分和显示电泳图谱,简单快速,对设备要求也不高,有早期诊断价值,所以被广泛使用。免疫组化是一种被研究人员反复改进的成熟方法,优点众多,已成为确诊TSE病的金标准。
朊病毒实验室确诊的依据主要是脑组织中有PrPSc蛋白的检出,目前最常用的就是免疫组化和免疫印迹两种方法。免疫学方法因为灵敏度高、特异性强、方法多样化,目前已经是检测朊病毒的广泛使用的主要方法了。其中酶联免疫吸附试验采用间接法和双抗体夹心法来检测抗原,方法快速、特异、灵敏、可定量、自动化等特点非常适合大批量样本的筛查。此外,目前在血液样本中具有较高敏感性且能够对病毒进行检查的方式为PCR核酸检测技术,这种技术对全血具有很高的敏感性,且是最有可能检查出血液中是否病毒的一项技术,因此被广泛地应用到捐赠血液的检查中,但是因为朊病毒的主要成分是蛋白质,检查核酸的一些检测方式很难检测出朊病毒。因此,在很长一段的时间内,如何从血液中快速检测朊病毒成为了医学界的难题。毕竟依据唯蛋白假说朊病毒都是由蛋白质组成,其主要成分为PrPSc,也是朊蛋白的一个亚型之一。在目前对朊病毒的研究中发现,PrP(prionprotein)是影响朊病毒感染的重要因素,造成传染性海绵状脑病需要PrP(prionprotein)参与其中,在Kocisko等(1994年)对PrPSc的研究中发现,PrPSc会促使PrPC转变成PrPSc,因此为朊病毒检测奠定了基础,虽然不能利用核酸检测方法确定病毒类型,但是却能够通过对蛋白质的错误折叠方式进行朊病毒检测,也就形成了现如今经常用于检测朊病毒的类“PCR”高灵敏度检测方法,这种方法的全称为蛋白质错误折叠循环扩增技术(PMCA),此技术为临床检测是否有朊病毒感染提供了依据。
疯牛病的诊断
临床诊断
疯牛病的平均潜伏期为4~6a,一旦发病,病牛呈亚急性或慢性进行性功能紊乱,病初食欲、体温接近正常,随着中枢神经系统渐进性病变的加剧,呈现典型的神经症状,随后出现全身症状。常见的神经症状是行为异常、共济失调和感觉异常。有人认为,如果病牛同时表现出上述3种症状并且症状超过1个月时,就可认为该牛患了疯牛病。行为异常主要表现为离群独处、焦虑不安、恐惧、狂暴或沉郁、神志恍惚、不自主运动(如磨牙、肌肉抽搐、震颤和痉挛等)、不愿通过水泥地面、拐弯、进人畜栏、过门或挤乳等。病畜当有人靠近或追逼时往往出现攻击行为。共济失调主要表现为姿势和运动异常,占病例的3%左右。病牛后肢运动失调,于急转弯时尤为明显。
患牛快速行走时步态异常,同侧前后肢同时起步,而后发展为行走时后躯摇晃、步幅短缩、转弯困难、易摔倒,甚至起立困难或不能站立而终日卧地。感觉异常占病例的90%左右,表现多样。一类表现为对触摸、光和声音过度敏感,用手触摸或用钝器触压牛的颈部、肋部时,病牛会异常紧张、颤抖,用帚轻碰后肢,也会出现紧张的踢腿反应,病牛听到敲击金属器械的声音,会出现震惊和颤抖反应,病牛在黑暗环境中对突然打开的灯光会出现惊恐和颤抖反应,50%的病牛在挤乳时乱踢乱蹬。另一类是病牛的触觉和听觉减退,表现为反应迟钝。以上3种临床症状占疯牛病病牛的87%左右,这与中枢神经系统的弥漫性病变相一致。将病牛置于安静和其所熟悉的环境中,有些症状可减轻,尤其是感觉衰退这种症状。羊搔痒病中出现的搔痒症状在病牛中也时有发生,但并不是主要症状。动物园中的牛科动物症状与家牛相似,但有些病例发病突然,病程快速。病牛最常见的全身症状表现为体质下降(78%)、体重减轻(73%)和产奶量减少,绝大多数病牛食欲良好。在临诊期的某些阶段,大约79%的病牛出现一种全身症状和一种神经症状。从初显症状到患牛死亡或急宰,病程可持续几周到12个月,最终病牛因症状加剧而不活动并死亡。
病理诊断
当可疑BSE病例被屠宰后,首要的诊断方法是病理组织学检查,这是评价其他方法是否有效的标准。剖检病牛尸体的肉眼病理变化不明显,肝脏等实质器官多无异常。病理组织学变化主要局限于中枢神经系统。脑组织切片镜检,病牛的脑组织神经元数目减少,原胶质细胞肥大,脑两侧灰质神经丛对称性海绵状病变和脑千神经核的神经元空泡化,脑组织中淀粉样核心周围有海绵状变性形成的“花瓣”,组成雏菊花样病理斑的特征性病变时即可诊断为BSE。神经元的特征性病理变化在延髓、小脑腹侧角处延髓、脑桥和中脑处的脑横切面切片中较常出现,变化也较-致。尤其在延髓的孤束核和三叉神经脊束核的发生频率很高。因此,检查大脑横切面神经元的空泡变性等退行性变化是诊断BSE发生初期的常规方法。有资料显示,80%的可疑BSE病牛,只检查延髓处的一张切片即可确诊该病,而且此切片的检出率相当于用更复杂方法确诊病例的99.6%。
疯牛病预防
疯牛病的感染路径主要是由消化道引起,而且由于朊蛋白的特殊性,现阶段还无法利用抗体疫苗进行有效的预防治疗。所以,目前对疯牛病的预防控制手段主要为隔断传播途径、灭除传染源。已有大部分国家采用对牛群、饲料、屠宰产品等的防控,避免朊蛋白潜在隐患造成疯牛病的四散。
牛群防控
为了防止疯牛病再次给人类造成伤害,目前欧盟已经对疯牛病制定了非常严格的管控措施,欧盟设立了许多专业的疯牛病检测机构,这些机构可通过对牛的部分组织器官进行迅速、精准的检测分析。进行检测的样本来源于在市场流通的牛、突然暴毙牛、由于特殊原因进行屠宰的24个月以上的牛等等。为了更好的防控疯牛病,美国农业部门多年来一直严格执行“BSE监控和准入制度”的要求;并且,美国农业部门建议实行国家认证体系,对国际市场中的所有的流通畜禽产品进行追踪检测。自2001年来,我国农业部门依据OIE(世界动物卫生组织)制定的相关标准,向全国推行疯牛的检测计划,主动与被动地对我国疯牛病进行检测。着重对进口牛群,甚至胚胎以及其后代进行全方位的跟踪调研,这一类的牛群一定要长期进行监测。
饲料防控
饲料,泛指一切人类饲养动物的食物,一般狭义上来说饲料就是指农业或者牧业饲养的动物的食物,因此其安全问题直接关乎着畜产品的食用安全。所以,重视饲料安全问题显得尤为迫切,要想从根源上做好饲料安全的防控工作,首先要清晰认识到饲料在整个畜牧生产中的作用与地位,对饲料安全造成影响的多重方面,饲料的法律法规、监管体系以及先进科技给畜产品安全性带来的重要影响。对饲料安全的保障工作非常艰辛、仔细且需要长时间的坚持,不但要建立完善的法律法规,而且要探索先进的饲料新技术,完善饲料加工工艺,才能从根源解决安全问题。要想实现畜牧安全可持续发展和人类食品安全,则必须探索开发新的饲料技术与产品。
屠宰产品防控
现阶段,我国在针对肉牛屠宰的安全风险管控工作,还存在一定的欠缺,急需建立与完善相关的对屠宰产品安全管理法律法规。可以借鉴世界各国为了降低疯牛病的风险,强化对疯牛病的监测所指定的相关制度,例如加拿大的牛废弃物管理条例,有效的提高了疯牛病的监管力度;美国农业部门颁布实施的一系列措施包括严禁在食品生产过程中添加任何牛下脚料,针对三十月以上年龄牛的感染力极高的器官进行隔离处理;日本则因为2001年检测出第一例BSE之后,便开始对所有屠宰牛进行逐一BSE检测,做到绝不漏放。
防治对策
欧盟的安全管理
2001年,欧盟成立了完善的质量控制管理机构——欧盟食品安全管理局,主要负责监视整个食品链。欧盟出台了一系列关于BSE控制和饲料安全的法规,概括起来主要包括以下4个方面:(1)BSE被动监测与主动检测计划及捕杀政策;(2)剔除指定风险物质(SRM);(3)安全地销毁风险物质;(4)动物源性饲料禁令。
欧盟强化了畜产品质量安全控制标准,实施严格而统一的质量安全体系。欧盟在1996年开始实施HACCP体系,并在欧盟食品卫生法中作出规定,要求畜产品生产和加工企业必须认识到生产的各个环节都应注意质量安全,并确保在HACCP系统上建立、实施、维持和修正适当的畜产品安全措施。为应对疯牛病问题,欧盟于1997年开始逐步建立了食品信息可追踪系统,以作为畜产品质量安全控制的重要手段。按照欧盟《食品法》的规定,食品、饲料、供食品制造用的家畜,以及与食品、饲料制造相关的物品,其在生产、加工、流通的各个阶段必须确立食品信息可追踪系统。
加拿大的安全管理
加拿大于1997年通过了《加拿大食品检验局法》,组建了加拿大食品检验局,统一行使包括饲料和畜产品在内的食品安全监管和执法权,实旅农场食品安全认可计划和疯牛病防范计划。
美国的安全管理
美国的安全措施主要有:健全的畜产品质甓安全法律、法规、标准体系;对畜产品生产、加工、贮运、销售过程进行全程控制;严密的畜产品质量安全管理组织机构体系;强化生产源头控制和进出口检疫。美国国会通过法律的制定来确保食品质量安全,制定质量标准体系是其保障畜产品质量安全的一项重要措施。
荷兰的安全体系
荷兰推行奶牛健康和健康记录的主要措施为:每一头奶牛必须拥有健康证明(强制性),经常性疾病控制检疫、监测奶牛登记注册(强制性)。对于饲料荷兰电有具体的规定和要求,只有符合IS09002质量管理标准和HACCP技术标准并获得优良制造实践证书的企业才允许向牧场提供混合饲料。由动物饲料商品委员会负责签发优良制造实践证书,由动物饲料质量服务机构和全国牲畜肉类检测服务机构负责产品检验和对质量法规执行情况进行监督。饲料制造过程的质量保证通过执行以下标准来实现:质量管理标准,用料成分检测标准监测有害成分,饲料制造设备的技术标准,制造和储存的卫生标准,饲料产品最终检验标准(成分和质量),最终产品和用料的运输、储存标准。