生物特性
處于最适攝取和容納外來DNA的生理狀态
制作方法
概述
轉化過程所用的受體細胞一般是限制修飾系統缺陷的變異株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突變體（Rˉ，Mˉ），它可以容忍外源DNA分子進入體内并穩定地遺傳給後代。受體細胞經過一些特殊方法（如電擊法，CaCl2 ，RbCl（KCl）等化學試劑法）的處理後，細胞膜的通透性發生了暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受态細胞（Compenent cells）。進入受體細胞的DNA分子通過複制，表達實現遺傳信息的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。将經過轉化後的細胞在篩選培養基中培養，即可篩選出轉化子（Transformant，即帶有異源DNA分子的受體細胞）。CaCl2 法簡便易行，且其轉化效率完全可以滿足一般實驗的要求，制備出的感受态細胞暫時不用時，可加入占總體積15％的無菌甘油于-70℃保存（半年），因此CaCl2法為使用更廣泛。
CaCl2法
1.将快速生長的大腸杆菌置于經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時Ca2+會使 細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與内膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受态細胞。細胞膜通透性發生變化，極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羟基－磷酸鈣複合物。聯合其它的二價金屬離子（如Mn、Co）、DMSO或還原劑等物質處理細菌，則可使轉化率提高100～1000倍。
2.此時，将該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s）， 細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動，并随機出現許多間隙，外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過複制、表達，實現遺傳信息的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3.将轉化後的細胞在選擇性培養基上培養，篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。
4.為了提高轉化效率， 實驗中要考慮以下幾個重要因素：
n 4.1. 細胞生長狀态和密度： 不要用經過多次轉接或儲于4℃的培養菌，最好從－70℃或-20℃甘油保存的菌種中直接轉接用于制備感受态細胞的菌液。細胞生長密度以剛進入對數生長期時為好，可通過監測培養液的OD600 來控制。DH5α菌株的OD600 為0.5時，細胞密度在5×107 個/ml左右（不同的菌株情況有所不同），這時比較合适。密度過高或不足均會影響轉化效率。
n 4.2. 質粒的質量和濃度： 用于轉化的質粒DNA應主要是超螺旋态DNA（cccDNA）。轉化效率與外源DNA的濃度在一定範圍内成正比，但當加入的外源DNA的量過多或體積過大時，轉化效率就會降低。1ng的cccDNA即可使50μl 的感受态細胞達到飽和。一般情況下，DNA溶液的體積不應超過感受态細胞體積的5％。
n 4.3. 試劑的質量： 所用的試劑，如CaCl2 等均需是最高純度的（GR.或AR.），并用超純水配制，最好分裝保存于幹燥的冷暗處。
n 4.4. 防止雜菌和雜DNA的污染：整個操作過程均應在無菌條件下進行， 所用器皿， 如離心管， tip頭等最好是新的，并經高壓滅菌處理，所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、DNA酶或雜DNA所污染， 否則均會影響轉化效率或雜DNA的轉入， 為以後的篩選、鑒定帶來不必要的麻煩。
電轉法
電擊法不需要預先誘導細菌的感受态，依靠短暫的電擊，促使DNA進入細菌，轉化率最高能達到109~1010轉化子/ug閉環DNA。因操作簡便，愈來愈為人們所接受。
意義
将構建好的載體轉入感受态細胞進行表達，不僅可以檢驗重組載體是否構建成功，最主要的是感受态細胞作為重組載體的宿主可以進行後續實驗，如蛋白質表達純化等工作。
