解释
双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成.
双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1g/mL的水溶液；
双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01g/mL的水溶液。
双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。
具体方法是
先将双缩脲试剂A加入组织样液，摇荡均匀，在加入双缩脲试剂B，摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。
原理
双缩脲法测定蛋白质含量实验中，双缩脲是在大约180°C条件下加热两个尿素分子，以达到释放出一个氨分子而获得的产物。在强碱性溶液中，缩二脲和硫酸铜形成紫色络合物，称为缩二脲反应。任何包含两个酰胺基或两个直接连接的肽键或可以通过中间碳原子连接的肽键的化合物都将发生缩二脲反应。
紫色复合色的强度与蛋白质浓度成正比，与蛋白质分子量和氨基酸组成无关。它可以用来确定蛋白质含量。测量范围是1-10mg蛋白质。
干扰测定的主要物质是：硫酸铵，Tris缓冲液和某些氨基酸。这种方法的优点是速度快，不同的蛋白质产生相似的颜色，干扰物质少。主要缺点是灵敏度差。因此，缩二脲法通常不用于蛋白质的精确测定。
应用
双缩脲（NH3CONHCONH3）是两 个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
H2O
O=C C=O
HN NH
R-CH CH-R
O=C Cu C=O
HN NH
R-CH CH-R
H2O
试剂作用
双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。
具体方法是：
先将双缩脲试剂A加入组织样液，振荡均匀（必须营造碱性环境），再加入双缩脲试剂B，振荡均匀。如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质，与蛋白质接触后的颜色呈紫色。
注意事项
在使用双缩脲试剂时候，必须注意，必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液，再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。(若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液，再加入氢氧化钠[NaOH]溶液，则无法充分制造碱性环境，此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应，生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀，导致现象不清，无法较好地达到实验目的.
与双缩脲区别
双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成。
双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1g/mL的水溶液；
双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01g/mL的水溶液。
双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在，遇蛋白质产生紫色。
简单的说，双缩脲是一种化学物质，而检测蛋白质用的那两个试剂之所以叫双缩脲试剂，是因为检测原理和双缩脲的形成相似。
方法学评价
优点：双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质，操作简单、快捷。既适合手工操作，又适合自动化分析，重复性好、线性关系好， 双缩脲试剂可以长期保存（ 若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制）。
缺点：灵敏度差，测定范围窄，样品需要量大，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，因此它常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。干扰测定的物质包括有：在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。
