结合可能
在模板变性后温度快速冷却至40℃～60℃(某个退火温度)的时候，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞，这就使PCR后期的过程成为可能。
温度与时间
取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度：Tm值(解链温度)=4(G+C)＋2(A+T)；复性温度=Tm值-(5～10℃)
在Tm值允许范围内，选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。
在金属加工领域，退火温度是指退火时金属应加热达到的温度。据有关文献介绍，不同金属材料的退火温度为：铂，900—1000℃；铜，650℃；黄铜，600—650℃；镍银，650—680℃；铝，283—350℃等。
应用
为得到退火温度对冷轧304不锈钢板形及力学性能的影响，利用拉伸机对不同退火温度下带的力学性能进行了测定,采用盲孔法对钢带表面残余应力进行了测定，得到了退火温度对钢带力学性能和残余应力的影响规律。
试验结果表明，随着退火温度的升高，屈服强度和抗拉强度先升高后下降，当退火温度为500℃，退火张力在9kgf/mm2时，304不锈钢带的屈服强度和抗拉强度最大；且在该温度下残余应力分布最均匀，说明304不锈钢在500℃退火时力学性能最佳且板形最好。
