制備方法
一種河豚毒素标準生物樣品的制備方法,其特征在于：
用乙酸甲醇溶液提取織紋螺樣品,将粗提取液用碳納米管固相萃取柱進行淨化,淨化的毒液進行高效液相色譜純化,然後冷凍幹燥濃縮,析出結晶,得到河豚毒素标準生物樣品。
具體包括以下步驟：1)織紋螺樣品的提取：取經充分勻質的織紋螺樣品與乙酸甲醇溶液混合,超聲水浴提取,再移取上清液,在殘渣中加入乙酸甲醇溶液,重複提取1次,合并兩次的粗提取液,備用；2)碳納米管固相萃取柱淨化。
移取步驟1)的粗提取液,用氨水調節pH,通過裝填碳納米管的固相萃取柱淨化,然後擠幹柱中液體,用甲醇、純水依次淋洗,擠幹萃取柱,再用乙酸-乙腈水溶液洗脫,收集洗脫液,備用；3)制備液相純化：将步驟2)收集的洗脫液,水浴旋轉蒸發濃縮至體積不變,除去乙腈溶劑；濃縮的毒液按照制備高效液相色譜進樣的條件純化,根據标準溶液河豚毒素的出峰時間,确定樣品中目标毒素組分采集時間,收集該段時間内的流出液；流出液旋轉蒸發濃縮,用氨水調節pH,冷凍幹燥至析出結晶,即河豚毒素标準生物樣品。
所述步驟1)中,織紋螺樣品與乙酸甲醇溶液的料液比為1：(5～6)；乙酸甲醇溶液中乙酸的體積濃度為0.5％～1.5％；超聲水浴提取的條件為：超聲波功率150W～250W,超聲波頻率5kHz～7kHz,水浴溫度50℃～70℃,提取時間10min～20min；所述步驟2)中,裝填碳納米管的固相萃取柱使用前經活化處理,具體為：稱取5g酸化處理的多壁碳納米管,用甲醇作為分散劑,濕法裝填于空的30mL小柱中,依次加入10mL乙酸-乙腈水溶液、10mL氨水活化和平衡小柱。
所述步驟3)中,制備高效液相色譜進樣的條件為：色譜柱：Inert Sustain Amide制備柱,規格為20mm×250mm,直徑為5μm；進樣量：5mL；流速：6.00mL/min；柱溫：35℃,紫外檢測波長200nm；流動相A為乙腈,流動相B為0.1％甲酸水溶液；梯度洗脫程序：0～10min,10％～80％流動相B；10.0min～12.5min,80％流動相B；12.5min～16.0min,80％～10％流動相B；16.0min～25.0min,10％流動相B。
解毒方法
方法：入院後經洗胃，導瀉及對症處理等治療後立即作腦電圖檢查，第2周及第4周複查腦電圖。按國際10/20系統放置頭皮電極，用國産十三道程腦電圖儀，以單極導聯及3個以上雙極導聯描記，在雙極記錄中睜眼；閉眼試驗及過度換氣3分鐘試驗，每次記錄20～30分鐘。
臨床治療
一般資料：本組共41例，為93年4月～98年7月所收治病人，其中男39例，女2例，年齡23～52歲，平均43.7歲。入選标準：有進食或誤食河鲀魚史；食用後出現上唇發麻、四肢無力、惡心、嘔吐、步态不穩等症狀，呼吸困難，血壓下降，昏迷等重症因無法檢測排除在外；無心、腦、腎、肝、肺等疾患。
結果：41例腦電圖中，未見異常1例(占2.44%)，腦電圖輕度異常11例(占26.83%)，主要表現為：基本波頻率變慢，有2例出現慢α波，α指數少于60%4例；θ波數量增多，θ指數超過20%7例，一個月後腦電圖都恢複正常。腦電圖彌散性異常22例(占53.66%)，主要特征是：基本節律解體，α指數少于20%者14例；慢活動數量顯着增多，θ指數超過30%者9例，θ指數超過15%者5例。
慢波絕大多數彌散而對稱地分布在兩側大腦半球各區，一個月後有18例恢複正常，4例持續4～6個月恢複正常。腦電圖陣發性異常和彌散性異常背景上有局竈性活動7例(占17.67%)，其中3例為陣發性θ節律伴有同步尖波，棘波，棘一慢波，一個月後2例恢複正常，4例6個月後恢複，1例持續至今(已有5年餘)仍未恢複正常，并出現震顫等表現。在彌散性和陣發性異常腦電圖的29例中有8例出現額部間歇性節律性θ活動。
随着科學的進步，令人恐懼的河豚毒素已步入了藥學殿堂，并且在治療人類疾病方面發揮着越來越重要的作用。河豚毒素在醫療上可以用于治療癌症。"新生油"是從河豚肝髒中提取的抗癌藥物。用于治療鼻咽癌、食道癌、胃癌、結腸癌的治療，療效很好。河豚可以用于鎮痛。對癌症疼痛、外科手術後的疼痛、内科胃潰瘍引起的疼痛，河豚毒素制劑均有良好的止痛作用。使用河豚素的好處是用量極少（隻需3微克），止痛時間長，又沒有成瘾性。特别是穴位注射，作用快、效果明顯，可以作為成瘾性鎮痛藥嗎啡和杜冷丁的良好替代品。
河豚毒素還可以止喘、鎮痙、止癢。河豚毒素可以治療哮喘、百日咳。對治療胃腸道痙攣和破傷風痙攣有特效。河豚毒素對細菌有強烈殺傷作用。從河豚精巢提取的毒素，對痢疾杆菌、傷寒杆菌、葡萄球菌、鍊球菌、霍亂弧菌均有抑制作用，而且可以防治流感。目前，在國際市場上，河鲀毒素結晶每克已經高達17萬美元。現在，河鲀毒素已經可以人工合成了。
社會讨論
讨論：TTX是目前自然界中發現的最毒非蛋白質物質之一，毒素主要有河豚毒和河豚酸兩種，它首先作用于胃腸道，可引起局部刺激症狀，其次進入血液後迅速發生中樞神經和末梢神經的抑制作用。本組中有1例腦電圖正常可能與進食量極少有關，異常腦電圖40例，占97.56%說明TTX對腦電波傳導有抑制作用，腦電圖異常有輕有重，從分布情況看以彌散性異常最多，占53.66%，部分陣發性和彌散性異常背景上有局竈活動，占17.07%，表現為頻率變慢，電壓變低，α波減少或消失，以Q波或δ波為主。從出現形式看，半數為持續性，部分為陣發性。
河豚毒中毒後毒後腦電圖改變可能是河豚毒選擇性地阻斷了丘腦、下丘腦及腦幹網狀結構上升激活系統膜對Na+的通透性，造成腦電波起步結構的代謝紊亂，引起腦電波的彌散性異常，或造成皮層活動的超同步化而呈現陣發性異常。本組中有8例出現額部間歇性節律性δ活動，這種節律的出現，推測是影響到丘腦的背内側核和髓闆内核、觸發了位于這些結構中的該波起搏點所緻。本組腦電圖的異常表現和上述病理特點是一緻的，但腦電圖的這些表現與其它疾病所緻的腦電圖改變類似，并無特異性，故不能單一依靠腦電圖改變來确定診斷，但對尚不知何類毒物中毒時是用來幫助鑒别診斷的重要依據。
一個月後複查腦電圖共有31例恢複正常，9例未恢複，半年後有8例恢複，提示河豚中毒後，患者大腦功能的損害是可逆的，但持續時間較長，而病情愈重，腦電圖改變愈大，持續時間更長。其中1例至今仍未恢複，并逐漸出現震顫麻痹、記憶力減退等改變，不同病期腦電圖的表現是不同的，急性期腦電圖異常程度較重，随着病情的好轉，腦電圖也逐漸恢複正常，也有稍慢于臨床恢複者，因而在病程中多次進行腦電圖描記可以幫助估計病情程度、判斷治療效果和轉歸。腦電圖多次複查見陣發性慢波，而普遍持續性或陣發性慢波出現是皮質下損害的特點之一。
當河鲀毒中毒患者出現上述特點時，可能預示預後不良。河豚毒中毒後的腦電圖改變沒有特異性，不能單靠腦電圖來确定河豚中毒，必須結合臨床表現和其它檢查，才有輔助診斷意義。由于腦電圖比較敏感，異常率高，用來判斷治療效果和轉歸是一種方便可靠的方法。但本組觀察例數尚少，且重危瀕死病人未納入觀察，可能較局限。
