菌落

菌落

細菌圍繞母細胞形成的子細胞集團
菌落(colony)是由單個細菌(或其他微生物)細胞或一堆同種細胞在适宜固體培養基表面或内部生長繁殖到一定程度,形成肉眼可見的子細胞群落。[1]菌落特征與微生物的菌體形态結構特征密切相關。通過菌落計數可以用于臨床檢驗以确定病原菌或用于判定食品被污染程度等。細菌是原核微生物,故形成的菌落也小;細菌個體之間充滿着水分,所以整個菌落顯得濕潤,易被接種環挑起;大腸杆菌在普通瓊脂培養基上面都是一樣的,圓形邊緣整齊,表面光滑,半透明,小凸起;典型的大腸杆菌在伊紅美藍瓊脂平闆上的特征為:深紫黑色、光滑、濕潤、帶有金屬光澤的圓形菌落。
    中文名:菌落 外文名:colony 别名: 介紹:細菌圍繞母細胞形成的子細胞集團 環境:固體培養基上(内) 溫度:46℃ 形态包括:大小、形狀、邊緣、光澤等

簡介

菌落(colony)由單個細菌(或其他微生物)細胞或一堆同種細胞在适宜固體培養基表面或内部生長繁殖到一定程度,形成肉眼可見的子細胞群落。

通常是細菌在固體培養基上(内)生長發育,形成以母細胞為中心的一團肉眼可見的、有一定形态、構造等特征的子細胞的集團,稱之為菌落。

培養

菌落是生長在固體培養基上,由單個細胞繁殖形成的、肉眼可見的微生物群體。

将分散的細胞或孢子被稀釋到一定程度,接種到培養基上,在一定培養條件下,使其生長繁殖。由于細胞受到固體培養基表面或深層的限制,子代菌體常以母細胞為中心聚集在一起,形成具有一定形态結構的子細胞群體。每個能夠生長繁殖的細菌細胞都可以在平闆上形成一個可見的菌落。

如果細菌菌體接種于半固體培養基中或液體培養基中,是不能形成菌落的。在半固體培養基中,接種的無鞭毛的細菌隻沿着穿刺線生長,而有鞭毛的細菌可在穿刺線的周圍擴散生長。

細菌菌體接種于液體培養基中,細菌生長後能使液體培養基變得混濁。混濁情況視細菌對氧氣需求的不同而有所不同:好氧菌僅使上部培養液混濁,厭氧菌使底部培養液混濁,兼性厭氧菌使培養液上下均勻混濁;有的細菌可在培養液表面形成菌環或菌膜,或在底部産生沉澱。

操作方法

根據标準要求或對污染情況的估計,選擇2~3個适宜稀釋度,分别在制10倍遞增稀釋的同時,以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液于滅菌平皿中,每個稀釋度做兩個平皿。将涼至46℃營養瓊脂培養基注入平皿約15ml,并轉動平皿,混合均勻。同時将營養瓊脂培養基傾入加有1ml稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿内作空白對照。待瓊脂凝固後,翻轉平闆,置36±1℃溫箱内培養48±2h,取出計算平闆内菌落數目,乘以稀釋倍數,即得每克(每毫升)樣品所含菌落總數。

操作要點

1.傾注用培養基應在46℃水浴内保溫,溫度過高會影響細菌生長,過低瓊脂易于凝因而不能與菌液充分混勻。如無水浴,應以皮膚感受較熱而不燙為宜。傾注培養基的量規定不一,從12~20ml不等,一般以15ml較為适宜,平闆過厚可影響觀察,太薄又易于幹裂。傾注時,培基底部如有沉澱物,應将底部棄去,以免與菌落混淆而影響計數觀察。

2.為使菌落能在平闆上均勻分布,檢液加入平皿後,應盡快傾注培養基并旋轉混勻,可正反兩個方向旋轉,檢樣從開始稀釋到傾注最後一個平皿所用時間不宜超過20min,以防止細菌有所死亡或繁殖。

3.培養溫度一般為37℃(水産品的培養溫度,由于其生活環境水溫較低,故多采用30℃)。培養時間一般為48h,有些方法隻要求24h的培養即可計數。培養箱應保持一定的濕度,瓊脂平闆培養48h後,培養基失重不應超過15%。

4.為避免食品中的微小顆粒或培基中的雜質與細菌菌落發生混淆,不易分辨,可同時作一稀釋液與瓊脂培基混合的平闆,不經培養,而于4℃環境中放置,以便計數時作對照觀察。在某些場合,為了防止食品顆粒與菌落混淆不清,可在營養瓊脂中加入氯化三四氮唑(TTC),培養後菌落呈紅色,易于分别。

注意事項

1、操作要快而準,包括材料、加樣、倒培養基。

2、吸液體時液體不能進入吸頭。

3、樣品稀釋時一定要混勻。

4、倒培養基前,瓶口要過火焰。

5、一定要有空白對照。

6、培養基溫度控制,培養基薄厚。

7、檢測時一定要使平皿完全暴露于空氣中。

特征和形态

菌落形态包括菌落的大小、形狀、邊緣、光澤、質地、顔色和透明程度等。每一種細菌在一定條件下形成固定的菌落特征。不同種或同種在不同的培養條件下,菌落特征是不同的。這些特征對菌種識别、鑒定有一定意義。

細胞形态是菌落形态的基礎,菌落形态是細胞形态在群體集聚時的反映。細菌是原核微生物,故形成的菌落也小;細菌個體之間充滿着水分,所以整個菌落顯得濕潤,易被接種環挑起;球菌形成隆起的菌落;有鞭毛細菌常形成邊緣不規則的菌落;具有莢膜的菌落表面較透明,邊緣光滑整齊;有芽孢的菌落表面幹燥皺褶;有些能産生色素的細菌菌落還顯出鮮豔的顔色。

腸道杆菌(Enteric bacilli)是一大群寄居于人和動物腸道中的革蘭氏陰性無芽胞内杆菌,常随人與動物糞便排出,廣泛分布于水、土壤或腐物中。大腸杆菌在普通瓊脂培養基上面都是一樣的,圓形邊緣整齊,表面光滑,半透明,小凸起;典型的大腸杆菌在伊紅美藍瓊脂平闆上的特征為:深紫黑色、光滑、濕潤、帶有金屬光澤的圓形菌落。

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