基本介紹
該酶是糖酵解反應中的一個酶,由4個30-40kDa的亞基組成,分子量146kDa。該酶基因為管家(house keeping)基因,幾乎在所有組織中都高水平表達,在同種細胞或者組織中的蛋白質表達量一般是恒定的,且不受含有的部分識别位點、佛波脂等的誘導物質的影響而保持恒定,故被廣泛用作抽提total RNA,poly(A)+ RNA,Western blot等實驗操作的标準化的内參。常用的内參有,ACTB(β-actin、β-肌動蛋白)、GAPDH或18S等。目的是在于避免RNA定量誤差、加樣誤差以及各PCR反應體系中擴增效率不均一、各孔間的溫差等所造成的誤差、這些都是管家基因,在各個組織中的表達量相對穩定,其中18S同整個基因譜有關(負責裝配),它在總RNA中占的比例最高。
轉染了GAPDH相關siRNA的HeLa細胞在轉染後48小時後不斷增殖。 紅:被标記的siRNA;藍:被染色的細胞核;綠色:GAPDH蛋白。
陰性對照(scrambled siRNA)的導入(左)對GAPDH蛋白的表達沒有影響,不過若轉入一個以GAPDH(右)為靶标的siRNA,則會導緻GAPDH蛋白表達水平的急劇下降。
參數
GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)是參與糖酵解的一種關鍵酶,由4個30-40kDa的亞基組成,分子量146kDa,檢測條帶大約在36kDa。GAPDH基因幾乎在所有組織中都高水平表達,廣泛用作Western blot蛋白質标準化的内參。因為GAPDH 作為管家基因在同種細胞或者組織中的蛋白質表達量一般是恒定的,因此在使用GAPDH内參抗體時,将每個樣品測得的目的蛋白含量與本樣品的GAPDH含量相除,得到每個樣品目的蛋白的相對含量,然後才進行樣品與樣品之間的比較。