結合可能
在模闆變性後溫度快速冷卻至40℃～60℃(某個退火溫度)的時候，可使引物和模闆發生結合。由于模闆DNA比引物複雜得多，引物和模闆之間的碰撞結合機會遠遠高于模闆互補鍊之間的碰撞，這就使PCR後期的過程成為可能。
溫度與時間
取決于引物的長度、堿基組成及其濃度，還有靶基序列的長度。對于20個核苷酸，G+C含量約50%的引物，55℃為選擇最适退火溫度的起點較為理想。引物的複性溫度可通過以下公式幫助選擇合适的溫度：Tm值(解鍊溫度)=4(G+C)＋2(A+T)；複性溫度=Tm值-(5～10℃)
在Tm值允許範圍内，選擇較高的複性溫度可大大減少引物和模闆間的非特異性結合，提高PCR反應的特異性。複性時間一般為30～60sec，足以使引物與模闆之間完全結合。
在金屬加工領域，退火溫度是指退火時金屬應加熱達到的溫度。據有關文獻介紹，不同金屬材料的退火溫度為：鉑，900—1000℃；銅，650℃；黃銅，600—650℃；鎳銀，650—680℃；鋁，283—350℃等。
應用
為得到退火溫度對冷軋304不鏽鋼闆形及力學性能的影響，利用拉伸機對不同退火溫度下帶的力學性能進行了測定,采用盲孔法對鋼帶表面殘餘應力進行了測定，得到了退火溫度對鋼帶力學性能和殘餘應力的影響規律。
試驗結果表明，随着退火溫度的升高，屈服強度和抗拉強度先升高後下降，當退火溫度為500℃，退火張力在9kgf/mm2時，304不鏽鋼帶的屈服強度和抗拉強度最大；且在該溫度下殘餘應力分布最均勻，說明304不鏽鋼在500℃退火時力學性能最佳且闆形最好。
