过氧化氢酶活性测定

过氧化氢酶活性测定

PHD测定活性的方法
过氧化氢酶活性测定(Determination of catalaseactivity),是根据过氧化氢酶(PHD)能催化过氧化氢生成氧的特性,常用碘量法和电极法。
    中文名:过氧化氢酶活性测定 外文名:Determination of catalaseactivity 别名:

氧化氢酶介绍

过氧化氢酶(catalase,CAT)普遍存在于植物组织中,是重要的保护酶之一,其作用是清除代谢中产生的H2O2,以避免H2O2积累对细胞的氧化破坏作用,因而其活性的高低与植物的抗逆性有关。

测定方法

紫外吸收法

H2O2对240nm波长的紫外光具有强吸收作用,CAT能催化H2O2分解成H2O和O2,因此在反应体系中加入CAT时会使反应液的吸光度(A240)随反应时间降低,根据A240的变化速率可计算出CAT的活性。

改良

比色测定法

过氧化氢酶(Catalase,CAT)广泛存在于各种生物体内.在测定CAT 活性的众多方法中,以紫外吸收测定法最为简便,但样品中应无在240nm 处有强吸收峰的杂质.Sinha 建立的测定方法可靠,不受样品中蛋白等物质的干扰,但操作和计算均较繁琐,不适合大批样品的测定。使用比色测定法。

碘滴定法

CAT能催化H2O2分解成H2O和O2,其活性大小以一定时间内分解H2O2的量来表示。当反应体系中有过量H2O2存在时,酶与底物(H2O2)反应结束后,用碘量滴定法测定剩余的H2O2。其测定原理是:在钼酸铵催化下,H2O2与KI反应,放出游离I2,然后用Na2S2O3滴定碘。根据空白和测定二者滴定差值,即可计算出酶催化分解H2O2的量

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