基本内容
英文名稱： inhibin-βA
中文名稱： 抑制素-βA
名詞解釋： 抑制素是性腺分泌的一種糖蛋白激素，它具有抑制垂體促卵泡素合成和分泌的作用。介紹了抑制素α亞基基因(INHA)、抑制素βA亞基基因(INHBA)、抑制素βB亞基基因(INHBB)的克隆、結構、定位、多态性、表達、分子調節及其與殖性能和癌症的關系。
簡介
抑制素是一種由女性卵巢顆粒細胞及男性睾丸支持細胞分泌的異二聚體蛋白質激素。它選擇性抑制卵泡刺激素（FSH）的分泌，對性腺也有局部旁分泌作用。完整的抑制素分子是一個分子量約為32KD的分子，由兩個不同的亞單位（a亞單位和b亞單位）經二硫鍵連接而成。卵泡液和血清中也可以發現a亞單位。此外，遊離的a亞單位與b亞單位沒有生物活性。nDSL的二聚體抑制素BELISA使用一對高度特異的抗體，僅與有功能的抑制素B分子特異性結合，不檢測體液中的遊離a亞單位。n抑制素B由a亞單位和bB亞單位組成。抑制素B的主要作用是通過對FSH的負反饋作用調節配子發育。幾種已發表的報告均表明，抑制素B可作為一種内分泌标記物，通過對它的檢測，可以監測男性或女性的性腺功能。
檢測原理
DSL-10-84100ACTIVE®InhibinBELISA試劑盒使用酶增強“雙位點”“兩步”雙抗體夾心免疫測定法。在實驗中，标準品、質控及待測血清樣本都在包被有抗抑制素bB亞單位抗體的微孔闆中孵育。孵育及洗闆之後，所有孔都加入生物素标記的抗抑制素a亞單位的檢測抗體。再孵育及洗闆之後，所有孔加入鍊黴和素-辣根過氧化物酶結合物。第三次孵育及洗闆之後，加入TMB底物孵育。之後加入終止液，最後用雙波長、在450nm及620nm處測吸光度。測得的吸光度與抑制素B的濃度成正比。标準品用于描繪吸光度的标準曲線，待測抑制素B的濃度可從此曲線中讀出。
試劑運用
試劑準備
洗液：在100ml濃縮洗液中加入900ml去離子水稀釋。室溫密封情況下可保存1個月。微孔闆：選擇實驗所需的闆條數。剩餘不用的部分随同幹燥劑密封放回原袋。試劑組成
包被有抗抑制素bB亞單位抗體的微孔闆（Anti-InhibinB-CoatedMicrotitrationStrips）：96孔，2-8ºC下密封保存。标準品A/樣本稀釋液（InhibinBStandardA/SampleDiluent）：2ml×1瓶，胎牛血清，含0pg/mL二聚體抑制素B。使用前2-8ºC下保存。打開後2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可長期保存。n标準品B-G（InhibinBStandardsB-G）：1ml×6瓶，胎牛血清，含二聚體抑制素B的濃度為10,30,100,250,500,1000pg/mL。使用前2-8ºC下保存。打開後2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可長期保存。n質控（InhibinBControls）：1ml×2瓶，濃度I、II，胎牛血清，含低濃度和高濃度的抑制素A二聚體。使用前2-8ºC下保存。打開後2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可長期保存。n樣本稀釋液A（InhibinBSampleBufferA）：10ml×1瓶，2-8ºC下保存。n樣本稀釋液B（InhibinBSampleBufferB）：10ml×1瓶，2-8ºC下保存。n抗體-生物素結合物（InhibinBAntibody-BiotinConjugate）（即用型）：10ml×1瓶，含生物素标記的抗抑制素a亞單位抗體。2-8ºC下保存。n酶結合物（濃縮）（Streptavidin-EnzymeConjugate）（即用型）：10ml×1瓶，含鍊黴和素-辣根過氧化物酶結合物。2-8ºC下保存。TMB底物溶液（TMBChromogenSolution）：15ml×1瓶，2-8ºC下保存。n終止液（StoppingSolution）：15ml×1瓶，為0.2M的硫酸。2-8ºC下保存。n濃縮洗液（WashConcentrate）：100ml×1瓶，2-8ºC下保存。操作步驟n
操作前所有試劑都應平衡至室溫(~25ºC)并充分混勻。标準品、質控及待測樣本需同時做雙份。n1.取出實驗所需闆條，并記錄各孔位置。
n2.在對應的孔中加入标準品、質控及待測樣本各50ul。
n3.每孔加入25ul樣本稀釋液A。
n4.每孔加入25ul樣本稀釋液B。
n5.封闆，以300-400rpm速度震蕩，室溫下過夜（14-18小時）。
n6.洗闆3次，在吸水紙上拍幹。
n7.每孔加入50ul抗體-生物素結合物。
n8.封闆，以500-700rpm速度震蕩，室溫下孵育1.5小時。
n9.洗闆6次，在吸水紙上拍幹。
n10.每孔加入50ul鍊黴和素-辣根過氧化物酶結合物。
n11.封闆，以500-700rpm速度震蕩，室溫下孵育20分鐘。
n12.洗闆6次，洗完最後一次以後，将洗液在孔内停留15分鐘再除去。在吸水紙上拍幹。
n13.在每孔中加入100ulTMB底物溶液。
n14.以500-700rpm速度震蕩，室溫下避光孵育15-30分鐘。
15.每孔加入100ul終止液。
16.30分鐘内在450nm處讀數。
注：必須以零标準作空白。如果能做到雙波長測定，可在600或620nm處讀數，将600（620）nm吸收值從450nm處減去，這樣可以減少光學誤差。
樣本收集及保存
使用血清樣本，靜脈穿刺術采集血液。樣本于2-8ºC可保存24小時，-20ºC或以下可保存30天。避免反複凍融樣本。不應采用溶血或脂血的樣本。冰凍的樣本在實驗前應解凍，并充分混勻。
結果計算
計算标準品、質控、待測樣本的平均吸光度。n使用數據縮減軟件，用線/線或對數/對數圖分析，根據各不同濃度标準品，以濃度（pg/ml）為X軸，所測得的吸光度為Y軸作标準曲線。通過雙孔數據的平均值描繪最佳曲線。n在标準曲線上，按質控及待測樣本各自的平均吸光度找到相對應的濃度。4.超過曲線最高濃度的樣本應經過0pg/ml的标準品适當稀釋後重新實驗。
5.低于曲線最低濃度的樣本應如實報告。
6.經過稀釋的值需乘以相應的稀釋倍數。如果樣本的吸光度超出了标準曲線的範圍，則此樣本可在405nm處第二次讀數，再作一條新的标準曲線（方法同上，如能做到雙波長測定，則設置600或620nm為雙波長值），取值。
