ANA:抗核抗體-中文百科頻道

原理簡介

抗核抗體在多種自身免疫病中均呈不同程度的陽性率，如系統性紅斑狼瘡（SLE，95%~100%）、類風濕性關節炎（RA，10%~20%）、混合性結締組織病（MCTD，80%~100%）、幹燥綜合症（SjS,10%~40%）、全身性硬皮病（85%~90%）、狼瘡性肝炎（95%~100%）、原發性膽汁性肝硬化（95%~100%）等，但經皮質激素治療後，陽性率可降低。抗核抗體在類風濕病人中約有20%～50%IgG型ANA呈陽性，小兒類風濕ANA的陽性率約19%～35%，伴發虹膜睫狀體炎者陽性率高（50%~90%），故ANA陽性預示類風濕有發生慢性睫狀體炎的可能。已發現75%類風濕病人有多形核白細胞的特異性ANA或抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）可使白細胞核受到破壞。

詳細内容

抗核抗體是一組對細胞核内的DNA，RNA，蛋白或這些物質的分子複合物的自身抗體。按其核内各個分子的性能不同可将各ANA區分開來，如(一)抗DNA抗體，（二）抗組蛋白抗體，（三）抗非組蛋白抗體，（四）抗核仁抗體等。每一大類又因不同抗原特性而再分為許多種類。因此ANA在廣義上是一組各有不同臨床意義的自身抗體，更确切的名稱應為抗核抗體譜。ANA主要存在于IgG，也見于IgM、IgA，甚至LgD及LgE中。

常見的核免疫熒光杭核抗體試驗有以下幾種圖形：（1）均質型：核質染色均勻一緻，這種染色型常與抗組蛋白和抗DNA抗體有關；（2）斑點型：核質染色呈斑點狀，抗可提取性核抗原（ENA）抗體常呈這種染色型；（3）周邊型：熒光染色圍繞在核膜周圍，它與抗DNA抗體有關；（4）核仁型：僅有核仁染色，具有抗4-6sRNA抗體呈現這種染色型；（5）着絲點型：在體外培養的細胞株（喉癌細胞）在核分裂相期時，可見到熒光染色的着絲點排列成特殊圖型，而在鼠肝做底物中看不到此類圖型，而被遺漏。

抗核抗體分類

抗核抗體的分類，由于核抗原不同，有多種不同的ANA。

抗DNA抗體

抗DNA抗體有抗雙鍊DNA（dsDNA）和抗單鍊(ssDNA)抗體之分。抗dsDNA抗體與SLE的關系密切，且随疾病的活動度而升降，病情好轉者其滴度多下降甚或轉陰。抗ssDNA抗體則與抗dsDNA不同，可在多種疾病出現，包括一些非自身免疫性疾病，如細菌和病毒感染。故在臨床上無實用價值。而抗dsDNA抗體被認為是紅斑狼瘡（SLE）所特有。

測定本抗體的方法有間接免疫熒光法（IFA），放射免疫法（Farr法），ELISA，血凝法等。我國的臨床工作者多采用前兩種方法，尤其是IFA法。它是以短膜蟲或馬錐蟲為底物，利用其體内含有的純雙鍊DNA，進行免疫熒光測定。血清稀釋度達1：5或更高者稱為陽性。以Farr法測抗DNA抗體，結合率>20%者為陽性。據北京協和醫院資料顯示，SLE陽性率為62%，活動期67.7%，緩解期29.1%，非SLE者陽性率雖達20%，但其結合率多在30%以下。有7%的正常人呈假性反應。結合率高于30%者幾乎都是活動期SLE。

抗DNA的自身抗體在SLE發病中起一定作用。在一些SLE患者，DNA大分子存在于循環中或粘附于多種器官的微血管結構，這些循環或器官原位抗原型DNA均可與循環自身抗體發生反應，形成免疫複合物，激活炎症系統，在一些器官如腎髒，肺和腦組織引起免疫複合物介導的疾病，導緻組織損傷。

抗可提取的核抗原

（extractablenuclearantigen.ENA）抗體，此抗體原經鹽水或磷酸緩沖液處理，易從胞核中提取出來，且不含DNA。應用免疫熒光技術，抗ENA抗體型染色多呈斑點型。此類抗原分為九種，故産生九種相應抗體。

（1）抗核糖核蛋白抗體(antiribonucleoprotein；抗RNP抗體)：抗原來源與SM相同。它對去氧核糖核酸酶不敏感，但對核糖核酸酶，胰酶敏感。1972年把它作為診斷混合性結締組織病（MCTD）的重要血清學依據。但以後發現本抗體可在多種風濕性疾病出現，不具備對某個病的特異性，但有助于鑒别結締組織病和非結締組織病。抗核RNP抗體見于近32%的SLE患者，幾乎見于所有MCTD患者。

（2）抗SM抗體：SM系一患者Smith的簡稱。1966年Tan&Kunkel首先在患者Smith體中發現。

抗原來源于小牛，兔胸腺，人脾等組織的一種酸性糖蛋白。抗SM抗體可見于1/3或以上的SLE患者，不出現于其他疾病中，對SLE診斷有特異性，成為很有價值的SLE診斷标志，但無此抗體不能排除診斷。

（3）抗SS-A抗體：系在發現Sjogren氏綜合征（SS）的"A"抗原後而命名，主要見于SS。本抗原可以從人、牛、豬脾中提取。它除存在核内外，也存在于細胞漿内。對胰酶敏感，對核糖核酸酶抵抗，能耐熱（56度）。

（4）抗Ha抗體：抗Ha抗體可與小牛胸腺可溶性核提取物(以及小牛和鼠的肝提取物)起反應。見于SS患者,亦稱之為SS-B抗體.應用沉澱素反應，補體結合以及熒光技術檢測。目前多數人認為13%SLE及33%SS患者有抗Ha沉澱性抗體。

（5）抗PM-1抗體：系多發性肌炎的特異性抗體。抗原系小牛胸腺核提取物，有人暫稱之為PM-1。最初有人應用補體結合抑制試驗，确定該抗體特性，在皮肌類患者中發現PM-1抗體。有人測定在多發性肌類患者陽性率13.6%，皮肌類（DM）20%，系統性硬化并肌炎25%，SLE并肌炎偶有陽性，在其他疾病和正常人均陰性。說明本抗體對肌炎診斷有一定特異性。

（6）抗MA1抗體：為近年發現抗核酸蛋白抗原的抗體，稱之為抗MA1抗體。該抗體隻出現于某些嚴重的SLE患者中。

（7）抗Scl-70抗體：因出現在硬皮病且其分子量為70000，故名。抗原為堿性非組蛋白，北京協和醫院對系統性硬化用免疫雙擴散法測定得抗Scl-70抗體陽性率為60%。在其他結締組織和非結締組織病偶有陽性，而正常人均陰性，說明本抗體有較高的特異性，是系統性硬化的标記抗體。

（8）抗Jo-1抗體：因患者而命名。國外報道在多發性肌炎（PM）患者陽性率為30-50%，合并有肺間質纖維化的肌炎則達60%，而在皮肌炎（DM）患者則低于10%，在其他疾病均陰性。

（9）抗Ku抗體：因患者命名，國外報道本抗體多見于合并有肌炎的系統性硬化患者，陽性率達55%。

總之，抗PM-1，抗Jo-1，抗Ku都與肌炎有關。

抗組蛋白抗體

組蛋白是一組堿性蛋白質，含有稍高量的賴氨酸及精氨酸。是與DNA形成的複合物，結合成DNA一組蛋白。組蛋白抗體見于藥物誘發的SLE。國外報道，用免疫熒光三步法測23例藥物緻狼瘡陽性率為96%，12例SLE中42%陽性。北京協和醫院以同樣方法檢測488例服用異煙肼，68例服用苯妥英鈉，40例服用複降片（内含肼苯哒嗪），都在服用6個月以上者和另133例服他巴唑3個月以上者，無一例查到本抗體。這種差異可能與近年來我國服用肼苯哒嗪和普魯卡因酰胺的患者較少之故，也不能除外人種不同而造成的差異。

抗着絲點抗體

其抗原為緊附于染色體着絲點的DNA蛋白質。因此需要選擇分裂相活躍的細胞作為底物，這種細胞的着絲點較易被暴露。多選用人喉癌上皮細胞（HEP-2），其優點是核大，分裂相多。國外報道本抗體多見于CREST綜合征（即表現為軟組織鈣化，雷諾現象，食管功能低下，指端硬化，毛細血管擴張）。陽性率達90%以上，稱之為CREST的标記抗體。根據協和醫院觀察測定結果，我國系統性硬化絕大部分是彌散型，CREST型極少見；抗着絲點抗體的陽性率在系統性硬化為20%，CREST型38%，彌散型10%，說明它不一定是CREST型的标記抗體。

抗核仁抗體

抗核仁抗體是一組對核仁不同RNA成分的抗體。由于成分（4-6sRNA）不同，因此構成斑塊，斑點，均質等不同圖型。本核體在以HEP-2細胞為底物間接免疫熒光檢查為明顯。協和醫院免疫組的陽性率是PSS38.5%，SLE6.1%，RA15.3%，（陽性者都合并有指端硬化），SS8.6%，PM/DM10.0%，雷諾現象25%，其他結締組織病和正常人均陰性。抗核仁抗體不僅在PSS最多見，且滴度亦高，故它對PSS診斷有一定的幫助。

抗核抗體的檢測在自身免疫病的臨床診斷、鑒别診斷、評價療效和預後估計中具有較大的意義，因此常将抗核抗體的檢測作為自身免疫病的重要初篩試驗。

抗核抗體的意義

臨床意義

（1）SLE：約99%（86%～100%）的活動期SLE病人ANA陽性，其滴度也常為1:80，但它的特異性差。對于未經治療的疑似患者，多次檢查抗核抗體，若結果陰性，應考慮其他疾病的可能。ANA陽性本身不能确診任何疾病，但ANA陽性

且伴有特征性狼瘡症狀則支持狼瘡診斷。ANA陰性幾乎可除外SLE的診斷。但應注意有5%的SLE病人ANA可為陰性，這其中大部分為抗SSA抗體、抗SSB抗體陽性，因為測定ANA通常用鼠肝或鼠腎做底物，而這些組織核内含SSA、SSB、Jo-1、rRNP抗原相對較少，所以不易測出其相應抗體。可加做人喉癌上皮細胞為底物的方法進行檢測。

陽性意義

抗核抗體譜包括抗核抗體（ANA）、抗DNA抗體、抗核内可溶性抗原抗體（ENA）。ENA又包括抗史密斯抗體（Sm）、抗核糖核蛋白體（RNP）抗體、抗幹燥綜合征A（SSA/Ro）抗體、抗幹燥綜合征B（SSB/La）抗體、抗硬皮病-70（Scl-70）抗體。臨床意義為：ANA：ANA為一系列抗細胞核抗原的自身抗體的總稱。一般應用免疫熒光的方法檢測。根據核熒光的類型分為以下幾種類型：①周邊型（M型）：核周邊的熒光增強呈環狀。M型的ANA主要有抗雙鍊DNA抗體組成，故高滴度的M型ANA幾乎僅見于SLE，因此有助于SLE的診斷。

②均質型（H型）：整個細胞核呈一片模糊而均勻的熒光。H型的ANA主要有抗脫氧核蛋白抗體組成。高滴度的H型ANA主要見于SLE，而低滴度H型ANA偶可見于藥物性狼瘡，JRA等其他自身免疫性疾病。③斑點型（S型）：核内熒光呈顆粒狀。是有抗Sm抗體，抗SSB/La抗體、抗Scl-70抗體等多種抗體組成。因此S型ANA可見于SLE，混合性結締組織病（MCTD），硬皮病（PSS），幹燥綜合征（SS），多法性肌炎及皮肌炎（PM或DM）等自身免疫病。抗DNA抗體：抗DNA抗體主要為抗雙鍊DNA（ds-DNA）抗體。抗ds-DNA抗體主要見于SLE患兒，其他疾病及正常人很少出現，是SLE的診斷标準之一。高滴度的抗ds-DNA抗體不僅表示疾病的活動性，而且提示疾病累及腎髒的可能性。ENA：①抗Sm抗體：其抗原主要為U簇小分子細胞核糖核蛋白微粒。抗Sm抗體是SLE的特異性抗體，為SLE的診斷指标之一。

Sm抗體與狼瘡的腎髒和中樞神經病變有關。②抗RNP抗體：其抗原主要為U1小分子細胞核糖核蛋白粒子，主要見于混合結締組織病，患者SLE、PSS或DM的臨床表現，高滴度的RNP抗體為混合結締組織病的标志。③抗SSA/Ro抗體：抗SSA抗體主要參與皮膚的病理損害，引起重度過敏為特征的急性皮膚型狼瘡的皮損，當母體血清中含有IgG類的抗SSA抗體，可引起新生兒狼瘡綜合征，出現典型的SLE皮損，該抗體還可以與胎兒的心髒的傳導系統結合，導緻新生兒先天性心髒完全型傳導組滞。④抗SSB/La抗體：該抗體是目前公認的幹燥綜合征的标志抗體，其他免疫性疾病如果發現抗SSB抗體陽性，患者一般有繼發性幹燥綜合征。⑤抗Scl-70抗體：其僅見于硬皮病，是硬皮病的特異性抗體。因此你還要進一步檢查查明引抗核抗體陽性的病因。

檢測方法

由于ANA的複雜性及多樣性，故測定方法繁多。ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴散、對流免疫電泳及免疫印迹技術等。

1．免疫熒光法檢測血清總ANA最常用的方法是熒光免疫組化法。多用小鼠肝切片或印片作為細胞核基質，結果比較穩定可靠，在熒光顯微鏡下見到的細胞核有熒光着色為陽性反應。如将患者血清先進行不同比例的稀釋，可以做大緻的定量試驗，在1:80稀釋仍然雖陽性時，對SLE的診斷有較大的參考價值。在油鏡下觀察結果，可以将ANA陽性的熒光現象分成4種主要的熒光核型，核型的确定對臨床診斷有進一步的參考價值。①周邊型表示抗DNA抗體存在；②均質型表示有抗DNP抗體；③斑點（顆粒）型多為抗ENA抗體；④核仁型多為抗核小體抗體。SLE患者常出現周邊型、勻質型或混合型，斑點型多見于混合結締組織病，而硬皮病多為核仁型；周邊型對SLE有較高的特異性。

有人用錐蟲或血鞭毛蟲（例如綠蠅短膜蟲試驗）作基質測定抗dsDNA抗體，因為這些血寄生蟲的動基體内含大量的純dsNDA，無其他抗原幹擾；在陽性結果時，可見鞭毛一端的動基體顯示清晰的熒光。因此該試驗用于測定抗dsDNA抗體具有特異性強和敏感性高的優點。另外，短膜蟲對人畜無害，可以人工養殖，來源方便，值得推廣。

2．放射免疫法常用檢測抗DNA抗體，有Farr法及過濾法。①Farr法的原理為用同位素标記DNA，被标記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結合，經50%硫酸铵飽和液沉澱，然後比較沉澱物和上清液中的放射活性，從而得出DNA結合活性，一般結合率大于20%為陽性。②過濾法是在分離結合物時用纖維素酯薄膜濾器（孔徑為0.45μm）進行過濾，遊離的DNA被濾去而與抗體結合的複合物被阻留在濾膜上。

3．ELISA臨床上主要是應用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體，其重複性及敏感性均較對流免疫電泳及雙擴散為高。已有試劑盒供應。

4．免疫印迹（immunoblotting）先将混合抗原作凝膠電泳，分離開不同的區帶，然将這些帶轉印到硝酸纖維素膜上，最後用酸标抗體或放射性同位素标記抗體進行檢測和分析。由于該試驗不需純化的單個抗原，可在同一固相上作多項分析檢測，靈敏度高，特異性強。故已廣泛用于自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測，如檢測抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。

另外，還可用傳統的瓊脂雙向擴散法、對流免疫電泳法、間接血凝法和補體結合試驗等。