選擇條件
展開劑的比例要靠嘗試.一般根據文獻中報道的該類化合物用什麼樣的展開劑，就首先嘗試使用該類展開劑，然後不斷嘗試比例，直到找到一個分離效果好的展開劑。展開劑的選擇條件：①對的所需成分有良好的溶解性；②可使成分間分開；③待測組分的Rf在0.2~0.8之間，定量測定在0.3～0.5之間；④不與待測組分或吸附劑發生化學反應；⑤沸點适中，黏度較小；⑥展開後組分斑點圓且集中；⑦混合溶劑最好用新鮮配制。
用途
一般來說，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來調節溶劑系統的極性，以達到好的分離效果，适合于生物堿、黃酮、萜類等的分離；中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調節，适合于蒽醌、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和萜類的分離；強極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調節，适合于極性很大的生物堿類化合物的分離。
選擇方法
很多時候,展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達到最佳效果。我們在實驗中，為了實現一個配體與其他雜質有效分離，曾經嘗試了很多種的溶劑組合，最後才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時,采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分開的迹象,再調整比例（或者加入第三種溶劑）,達到最佳效果；如果沒有分開的迹象（斑點較“拖”），最好是換溶劑。
對于在矽膠中這種酸性物質上易分解的物質，在展開劑裡往往加一點點三乙胺，氨水，吡啶等堿性物質來中和矽膠的酸性。（選擇所添加的堿性物質，還必須考慮容易從産品中除去，氨水無疑是較好的選擇。）分離效果的好壞和所用矽膠和溶劑的質量很有關系：不同廠家生産的矽膠可能含水量以及顆粒的粗細程度，酸性強弱不同，從而導緻産品在某個廠家的矽膠中分離效果很好，但在另一個廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質含量對分離效果都有明顯的影響。溫度，濕度對分離效果影響也很明顯，在實驗中我們發現有時同一展開條件，上下午的Rf截然不同
展開劑的選擇主要根據樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮
在進行薄層層析時，首先應該知道未知化學成分的類型，其極性的大緻歸屬，從提取液或從色譜柱的流動相極性可知，另外某樣品裡含多種化學成分先按極性不同大緻分，然後細分，對于分離未知的化學物質，展開劑的選擇也是一個摸索的過程，不應該僅僅從展開劑考慮，多因素綜合衡量！
展開劑溶劑
溶劑：層析過程中溶劑的選擇，對組分分離關系極大。在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開劑。洗脫劑的選擇，須根據被分離物質與所選用的吸附劑性質這兩者結合起來加以考慮。在用極性吸附劑進行層析時，當被分離物質為弱極性物質，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質為強極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質用吸附性較弱的吸附劑（如以矽藻土或滑石粉代替矽膠），則洗脫劑的極性亦須相應降低。
柱層試驗
在柱層操作時，被分離樣品在加樣時可采用于法，亦可選一适宜的溶劑将樣品溶解後加入。溶解樣品的溶劑應選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。然後漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個十分緩慢的過程，稱為“梯度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個成分逐個被洗脫。如果極性增大過訣（梯度太大），就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有時可以用溶劑的介電常數（ε）來表示。介電常數高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅适用于極性吸附劑，如矽膠、氧化鋁。對非極性吸附劑，如活性炭，則正好與上述順序相反，在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑中為強。
被分離物質的性質：被分離的物質與吸附劑，洗脫劑共同構成吸附層析中的三個要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個成分的分離情況，直接與被分離物質的結構與性質有關。對極性吸附劑而言，成分的極性大，吸附住強。
當然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團的數目愈多，被吸附的住能就會更大些，在同系物中碳原子數目少些，被吸附也會強些。總之，隻要兩個成分在結構上存在差别，就有可能分離，關鍵在于條件的選擇。要根據被分離物質的性質，吸附劑的吸附強度，與溶劑的性質這三者的相互關系來考慮。
首先要考慮被分離物質的極性。如被分離物質極性很小為不含氧的萜烯，或雖含氧但非極性基團，則需選用吸附性較強的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醚或苯進行洗脫。但多數中藥成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般Ⅲ～Ⅳ級）。采用的洗脫劑極性應由小到大按某一梯度遞增，或可應用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度有很大關系。
現以實例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關系。如有多組分的混合物，象植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。當以矽膠為吸附劑時，使油脂被吸附後選用一系列混合溶劑進行洗脫，油脂中各單一成分即可按其極性大小的不同依次被洗脫。
又如對于C-27甾體皂甙元類成分，能因其分字中羟基數目的多少而獲得分離：将混合皂甙元溶于含有5%氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶劑進行梯度洗脫。如改用吸附性較弱的矽酸鎂以替代氧化鋁，由于矽酸鎂的吸附性較弱，洗脫劑的極牲需相應降低，亦即采用苯或含5%氯仿的苯，即可将一元羟基皂甙元從吸附劑上洗脫下來。這一例子說明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時，需用不同的溶劑才能達到相同的分離效果，從而說明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關系。
薄層層析
簿層層析：薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般将柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進行層析時一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。
薄層層析的特點：薄層層析在應用與操作方面的特點與柱層析的比較。
吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區别在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細，一般應小于250目，并要求粒度均勻。用于薄層層析的吸附劑或預制薄層一般活度不宜過高，以Ⅱ～Ⅲ級為宜。而展開距離則随薄層的粒度粗細而定，薄層粒度越細，展開距離相應縮短，一般不超過10厘米，否則可引起色譜擴散影響分離效果。‘’
展開劑的選擇：薄層層析，當吸附劑活度為一定值時（如Ⅱ或Ⅲ級），對多組分的樣品能否獲得滿意的分離，決定于展開劑的選擇。中草藥化學成分在脂溶性成分中，大緻可按其極性不同而分為無極性、弱極性、中極性與強極性。但在實際工作中，經常需要利用溶劑的極性大小，對展開劑的極性予以調整。
