定義
1849年，德國化學家斐林（Hermann vonFehling，1812年-1885年）發明了斐林試劑。它是由氫氧化鈉的含量為0.1 g/mL的溶液和硫酸銅的含量為0.05 g/mL的溶液，還有含量為0.2g/mL酒石酸鉀鈉配制而成的，其本質是銅離子和酒石酸形成的配合物——酒石酸合銅（高中認為是新制的氫氧化銅）。
斐林試劑是二價銅離子的酒石酸鉀鈉配合物，可以被脂肪醛或還原性糖還原為氧化亞銅。斐林試劑為深藍色溶液， 在與脂肪醛或還原性糖共熱時， 藍色消失，析出紅色的氧化亞銅沉澱。在氧化亞銅析出過程中， 反應液的顔色可能經過由藍色→綠色→黃色→紅色沉澱的逐漸變化，反應較快時，直接觀察到紅色沉澱。
它與可溶性的還原性糖（葡萄糖、果糖和麥芽糖）在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的氧化亞銅沉澱。因此，斐林試劑常用于鑒定可溶性的還原性糖的存在與否。
配制方法
配制方法：0.1 g/mL NaOH（甲液）和0.05 g/mL CuSO4（乙液）。甲液配制方法是将50g氫氧化鈉和137g酒石酸鉀鈉溶于500 mL蒸餾水中（貯于帶橡皮塞的瓶中）。乙液配制方法是将34.5g結晶硫酸銅溶于500mL水中，加0.5 mL硫酸。混合均勻。
斐林試劑的使用方法：一般将斐林試劑甲液和乙液等體積混合（或在2 mL甲液中滴4～5滴乙液），再将混合後的斐林試劑倒入待測液，水浴加熱或直接加熱（高中人教版生物必修一中為60℃水浴加熱）。如待測液中存在還原糖，則呈現磚紅色沉澱；如待測液中不存在還原糖，則仍然呈藍色。
還原糖實驗
1、向試管内注入2mL待測組織樣液。
左側為氫氧化銅沉澱，右側為磚紅色沉澱
左側為氫氧化銅沉澱，右側為磚紅色沉澱
2、向試管内注入1mL斐林試劑（甲乙液混合均勻，甲液量較多，乙液隻需少量。然後再注入）。【人教版高一生物必修一第十八頁說的是“甲乙液等量混合均勻後再注入】
3、将試管放入盛有50~65℃溫水的大燒杯中加熱約2min。
4、觀察試管中出現的顔色變化（應為淺藍色——棕色——磚紅色沉澱）。
對比
班氏試劑
斐林試劑和班氏試劑的使用方法及原理不盡相同。斐林試劑和班氏試劑都是檢驗還原性糖的試劑，二者的使用方法及原理、成分也有區别，下面就從這幾種試劑的使用原理、成分及使用方法等方面做一簡單總結。
（1）班氏試劑常用于尿糖的鑒定，其配方與斐林試劑不一樣，其配方為：
①400mL水中加85g檸檬酸鈉和50g無水碳酸鈉；
②50mL加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅。制成溶液；
③把CuSO4溶液倒入檸檬酸鈉溶液中，邊加邊攪，如産生沉澱可濾去。
（2）其反應原理與斐林試劑略有差别。利用斐林試劑鑒定時，斐林試劑甲和斐林試劑乙直接反應生成酒石酸絡銅離子。
酒石酸絡銅離子和可溶性還原糖在加熱條件下反應産生磚紅色沉澱。而班氏試劑中的産生卻是這樣的：檸檬酸鈉作為絡合劑，由碳酸鈉提供堿性。CuSO4與檸檬酸鈉溶液和Na2CO3溶液混合時生成檸檬酸絡銅離子，檸檬酸絡銅離子與葡萄糖中的醛基反應生成磚紅色沉澱。
（3）兩種試劑的保存方式不同。斐林試劑甲和斐林試劑乙混合後會因酒石酸有一定的還原性而自發地緩慢産生氧化亞銅沉澱，因此斐林試劑一般為現用現配；而班氏試劑的配方中，檸檬酸鈉比較穩定，實際堿性也不強，不易還原銅離子産生氧化亞銅沉澱，因此該試劑可長期保存。
當然，無論用班氏試劑還是斐林試劑，歸根結底都是二價銅與醛基在沸水浴加熱條件下反應而生成磚紅色的沉澱，兩者反應現象一樣，這就是二者的相同之處。
雙縮脲試劑
斐林試劑和雙縮脲試劑
斐林試劑和雙縮脲試劑都由NaOH溶液（斐林試劑中還有酒石酸鉀鈉）和CuSO4溶液組成，但二者有如下三點不同：
（1）溶液濃度不同
CuSO4溶液稱為斐林試劑乙，其濃度為0.05 g/mL；
CuSO4溶液稱為雙縮脲試劑B，其濃度為0.01 g/mL。
（2）使用原理不同
斐林試劑是新配制的溶液，它在加熱條件下與醛基反應，被還原成磚紅色的沉澱，可用于鑒定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時，溶液的顔色變化過程為：淺藍色→棕色→磚紅色（沉澱）。
鑒定生物組織中是否含有蛋白質時，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑，發生的是雙縮脲反應。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑産生紫色反應。蛋白質的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡合成紫紅色的化合物。顔色深淺與蛋白質濃度成正比。
（3）使用方法不同
斐林試劑使用時，先等體積混合甲、乙兩液，而後立即使用，反應需要加熱（有時不加熱也反應）；雙縮脲試劑使用時，先加入NaOH溶液（1mL），振蕩搖勻，造成堿性的反應環境，然後再加入3~4滴CuSO4溶液，振蕩搖勻後觀察現象。
