基本内容
TE緩沖液是一種能在加入少量酸或堿時抵抗pH改變的溶液。PH緩沖系統對維持生物的正常pH值,正常生理環境起重要作用。多數細胞僅能在很窄的pH範圍内進行活動,而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化。在生物體中有三種主要的pH緩沖體系,它們是蛋白質、重碳酸鹽緩沖體系和磷酸鹽緩沖體系。每種緩沖體系所占的分量在各類細胞和器官中是不同的。
硼酸鹽:硼酸鹽與許多化合物形成複鹽、如蔗糖。
檸檬酸鹽:檸檬酸鹽離子容易與鈣結合,所以存在有鈣離子的情況下不能使用。
磷酸鹽:在有些實驗,它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物,重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉澱出來。而且它在pH7.5以上時緩沖能力很小。
三羟甲基氨基甲烷:它可以和重金屬一起作用,但在有些系統中也起抑止的作用。其主要缺點時溫度效應。這點往往被忽視,在室溫pH是7.8的Tris一緩沖液,在4℃時是8.4,在37℃時是7.4,因此,4℃配制的緩沖液拿到37℃測量時,其氫離子濃度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下,緩沖能力差。
配置
組成濃度:10mM Tris-HCl,1mM EDTA,PH=8.0;
配制量:500ml;
配制方法:量取下列溶液于500ml燒杯中;
1M Tris-HCl Buffer,PH=8.05ml;
0.5M EDTA,PH=8.01ml;
向燒杯中加入約400ml ddH2O均勻混合;将溶液定容到500ml後,高溫高壓滅菌;室溫保存。
作用及用途
作用
TE緩沖液是弱堿性,對DNA的堿基有保護性,DNA在它是的穩定性較好,不易破壞其完整性或産生開環及斷裂,,包括提取好的DNA也要放在TE緩沖液中保存。
用途
TE緩沖液是Tris+EDTA緩沖液,這種緩沖液我們一般用作溶解劑或保持劑,主要是調控PH,TAE是一種電泳緩沖液,主要用于DNA分子的電泳。TE組成濃度:10mM Tris-HCl,1mM EDTA,PH=8.0配制量:500ml配制方法:量取下列溶液于500ml燒杯中1M Tris-HCl Buffer,PH=8.0,5ml 0.5M EDTA,PH=8.01ml向燒杯中加入約400mlddH2O均勻混合;将溶液定容到500ml後,高溫高壓滅菌;室溫保存。
TAE是使用最廣泛的緩沖系統。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質量(TBE中電泳時測出的相對分子質量會大于實際分子質量),且雙鍊線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%,電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液将取得更好的分離效果,此外,回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統進行電泳。TAE的缺點是緩沖容量小,長時間電泳(如過夜)不可選用,除非有循環裝置使兩極的緩沖液得到交換。